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你问“沃”答 | 如何掌握牙体组织最佳制片方法及其技术要领?

2022.04.07

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牙体组织的主要构成:硬组织——牙釉质、牙本质及牙骨质;软组织——牙髓。软硬结合的特殊性给制片带来了很大的难度。但莫慌莫怕,下面就给大家介绍一种效果较好的牙体组织制片技术。

1、标本处理

  1. 步骤:新拔除的牙齿立刻用牙科电机从中间分切成两半,充分暴露牙髓组织,然后放入固定液中固定48-72h,采用10%甲醛液或10%AF液等固定液。

  2. 注意:牙髓必须充分暴露,组织固定充分,使组织和细胞保持生活的形态结构,减轻酸性脱钙液对组织的损伤。

2、脱钙处理

通过各种脱钙方法使钙盐溶解、脱出,使牙体变软。这一步最为关键。

1)原则:

① 是否能完全脱钙

② 不损伤组织

③ 不妨碍组织染色

④ 方法简便易操作

2)脱钙剂选择:

在制作脱钙牙切片过程中,主要用酸性试剂脱钙法,脱钙剂主要选用甲酸①和P-R液②,操作简便,脱钙迅速。

3)脱钙时间的把控:

在脱钙过程中,准确掌握脱钙时间十分重要,时间短了,脱钙不充分,则无法切片;时间长了,可能造成组织结构损伤。

4)酸的中和与水洗:

组织经酸类脱钙后,必须用碱性溶液中和组织中的酸性物质,否则会影响染色效果,用5%硫酸锂或硫酸钠处理6-12h,然后流水冲洗6-12h,就可除掉组织中的蜡酸性、碱性及甲醛等物质,使组织的染色效果较好。

3、脱水、透明及包埋

1)脱水步骤:

① 60%→70%→80%乙醇各8~12h

② 95%乙醇共6~8h

③ 100%乙醇共4-6h。必须充分脱水,但高浓度乙醇不应浸泡太长,否则将使组织变硬变脆

2)透明:

透明剂用氯仿效果较好,氯仿 Ⅰ、Ⅱ各1~2h。

3)浸蜡包埋:

蜡Ⅰ(54~56℃)2h→蜡Ⅱ(56~58℃)1~2h→蜡Ⅲ(58~60℃)1~2h。温箱温度应控制在60~64℃之间。过低影响蜡的浸入,过高可使组织变焦。然后用58~60℃的石蜡包埋。

4、切片、染色、封片

切片时刀刃必须锋利,组织与刀刃之间角度不大于5°。HE染色,脱水、透明中性树胶封片。     
这样就能制出一张效果较好的牙体组织片子了。

释义:①甲酸:为单纯无机酸类脱钙剂,脱钙速度比无机酸类慢,但对组织损伤轻,染色影响小,一般采用10%-30%浓度(甲酸10-30ml,蒸馏水100ml)。

释义:②P-R液:氯化铝7g + 甲酸5ml+浓盐酸8.5ml+蒸馏水100ml。P-R液为混合脱钙剂,不仅脱钙速度快,而且对组织结构和染色效果都无明显影响。


【参考文献】

1、病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越,陈军主编.人民卫生出版社


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