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你问“沃”答 | 淋巴组织的最佳制片方法如何操作?

2022.02.17

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我们都知道淋巴结组织结构致密,细胞丰富,同时外围有致密结缔组织的被膜包绕,这些因素决定了淋巴组织制片的难度会更大。但淋巴结活检是诊断淋巴造血组织原发或继发疾病的主要方法。组织固定、处理;切片,染色时间和分色处理等均会不同程度地影响到淋巴结组织制片,今天就给大家整理介绍怎样保证淋巴组织的制片质量。


一、流程

1、固定:中性甲醛(10%)固定12h

2、脱水

3、常温80%乙醇(60min)

(1)95%乙醇(60min)

(2)95%乙醇Ⅱ(120min)

(3)无水乙醇Ⅰ(30~60min)

(4)无水乙醇Ⅱ(30~60min)

(5)无水乙醇Ⅲ(30~60min)

4、透明

(1)二甲苯Ⅰ(20min)

(2)二甲苯Ⅱ(20min)

(3)二甲苯Ⅲ(20min)

5、浸蜡

(1)石蜡Ⅰ(45~50℃:60min)

(2)石蜡Ⅱ(56~58℃:60min)

(3)石蜡Ⅲ(56~58℃:60min)

6、包埋:尽量选择较韧的石蜡做包埋

7、切片:厚度推荐2-3μm最佳

8、HE染色:

(1)用新鲜配制的Harris苏木精液染色6~9min

(2)1%盐酸乙醇分化

(3)镜下控制细胞核染色的分化情况

(4)伊红液染色2分钟,常规脱水,透明,封片

二、技术要领
1、快速对新鲜淋巴结组织进行取材和固定。2mm取材厚度的淋巴结样本,6小时固定也可获得较好制片效果;3mm样本固定的时间以12小时为佳。对于常规淋巴结组织样本的固定时间应不少于12小时,避免做免疫表型检测时,染色效果受影响,部分抗原标记呈假阴性。
2、淋巴结脱水可选择人工或机器,视科室情况而定。淋巴结切片的厚度以2~3μm为佳。
3、室温条件(18~22℃)下,对于厚度为2~3μm的石蜡组织切片,分3次进行二甲苯脱蜡(共15分钟)能达到满意的脱蜡效果。也可采用正丁醇替代二甲苯,效果更好。组织不易发生收缩和变脆,也容易切出厚薄均匀、连片性好的片子。
4、苏木精染液的使用时间、染色数量、及时更换是保证染色质量的关键因素;同时可针对苏木精染液的新旧程度调整染色时间。

5、高倍镜下观察苏木素上色情况和分色程度,找到染色和分色时间的最佳组合,并根据实验室的使用情况适时作出凋整。


【参考文献】

1、病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越,陈军主编.人民卫生出版社



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