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你问“沃”答︱组织脱水问题及应对方法

2022.01.14

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脱水是石蜡切片制作中的一个重要环节。在经过固定和水洗步骤后,组织会含有大量水分,而水与石蜡又不能相混,必须先用脱水剂渗透到组织中,将组织中水分全部去掉。组织块脱水是否完全,会直接影响制片效果。但是,在病理制片中经常发生因脱水不好而出现各种问题,本期我们将分享脱水过程中常见问题及应对方法:

01

怎样判断是否是脱水出了问题?什么样的现象说明是脱水出的问题?

脱水不好,标本会出现两种情况:

1)脱水不足。组织在包埋蜡块中呈现与石蜡硬度不一的现象,结果是虽能切出蜡带,但蜡带中组织不成片。因为脱水不净,透明剂与石蜡都无法浸入组织当中,形成了没有浸蜡的组织蜡块。

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2)脱水过度。组织因为脱水过度(脱水剂太强、脱水温度过高、脱水时间太长等)致使组织细胞结构发生不可逆的变化,即使透明剂和石蜡都顺利浸透组织,但因组织本身已遭破坏,切出的片子也是很糟糕的,呈现组织细胞碎裂,收缩变形的现象。

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02

影响脱水效果的因素有哪些?

1)人工脱水操作,每一步需要人来完成,稍有不慎,就会在时间上有所延误,脱水处理时间不是很精准。

2)自动脱水机操作,在脱水时,大小组织一窝煮,造成小组织过度处理产生硬脆现象,而太大的组织又处理不够,难以切出好片。

3) 其他方面,如脱水剂加热;取材时组织切取太大、太厚;标本固定不充分;标本组织结构较特殊;脱水液种类选择不当;因脱水液使用过久,使用率又高,引起脱水液被稀释,有效浓度降低等都是影响脱水效果的因素。

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03

组织脱水后出现发脆的原因是什么?

1)脱水过度。一般认为组织发脆跟高浓度乙醇有关,忽视了与低浓度的乙醇关系。其实低浓度乙醇具有强大穿透力,比纯乙醇更容易渗透到组织块内部使之脱水。组织如果在低浓度乙醇里充分脱水,在高浓度乙醇里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水分,仅需短时间就可完成。脱水过度引起组织发脆可能是起始脱水浓度过高引起。

2)脱水中加温,且温度超过36℃;脱水剂内加有丙酮也会造成组织发脆。
04

病理细小质嫩的穿刺组织行脱水时极易出现脱水过度的情况,如何掌握?

由于各种穿刺活检组织及小动物内脏组织标本小,组织稚嫩,质地柔软易碎,标本珍贵等特点,如按常规标本处理,容易造成组织过度收缩脆裂失去柔韧性,切片时呈碎渣样,不能完整制片,甚至无法制片,可以参考以下解决方法:

1) 收到标本后,立即置于中性缓冲甲醛固定液中,如果标本过小,可先点上伊红后用擦镜纸包起来放在固定液中固定,可防止组织丢失。固定液要保持新鲜、液量要求充足,固定时间为1~12小时。

2)脱水处理:

用量时长
75%乙醇30分钟
85%乙醇50分钟
90%乙醇Ⅰ50分钟
95%乙醇Ⅱ 90分钟
无水乙醇Ⅰ90分钟
无水乙醇Ⅱ90分钟
以上就是本期的分享,在组织脱水环节,你还有哪些疑问,欢迎你在微信后台留言,我们将为您一一解答。

我们下期见~

【参考文献】

1、病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越,陈军主编.人民卫生出版社


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