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组织固定是组织病理学中的基本操作步骤，只有经过固定，才能完成随后一系列的制作，直到切片的最后完成。但在日常的病理制片中，经常发生因固定不好出现各种问题，本期我们总结了4个组织固定常见问题并提供参考方法，期望能给广大病理工作者日常工作带来些许启发。
选择合适容器。一般容器的容积是组织的10~15倍以上，以瓶口较大的为宜，便于标本放取。 固定时间要足够。根据标本体积大小不同，固定时间应有所不同，组织越大越厚，固定时间应越长。一般4~12小时或更长。在温箱内将固定液稍加温，可使固定作用加快而缩短固定时间。 固定液要足量。一般应为组织体积的5~10倍，多比少好。标本最好悬浮于固定液中，漂浮于固定液之上或沉于底部都不利于固定液渗入。标本块多时，固定时不应重叠。不要先将标本放入容器后再注入固定液，以免标本粘附，固定不均匀。新鲜标本应及时固定，否则或因组织陈旧，或因固定不当，使组织原有结构消失而影响观察。 对于某些需要制作神经染色和酶反应等组织的固定，要求较一般严格，组织大小、固定时间、温度的适当都应慎重考虑，尤其是对于酶反应的固定液，一般都要置于冰箱，在低温的条件下进行固定。固定不好，是得不到满意的切片和合乎标准的反应效果的。 把已包埋的固定不良的组织重新放入石蜡中融蜡，使组织周围多余的蜡去除 把已除去石蜡的组织放入二甲苯Ⅰ（或环保脱蜡剂）中30分钟，二甲苯Ⅱ30分钟，以去除组织内含有的石蜡。 把经过两道二甲苯的组织重新逐级放入乙醇。 无水乙醇Ⅰ→无水乙醇Ⅱ→95%乙醇→80%乙醇中各20分钟，此过程应注意各级乙醇应是初次使用，而且不可重复使用，以免已脱蜡的组织又重新沾上乙醇中含有的蜡。 如为胃镜取得小标本，组织已干枯，应在以上程序后水化，应放1%~2%冰醋酸内使组织软化后重新水洗，水洗时间视标本大小确定。 把经过各级乙醇浸泡得组织重新放入70%甲醛乙醇溶液中固定。 免疫组化染色标本在取材后需立刻投于固定剂中，使组织和细胞的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态，原位保存抗原，避免抗原失活或弥散。常用固定液： 醛类：甲醛应用最广，优点是形态结构保存好，穿透性强，组织收缩少，缺点是放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色。注意缩短固定时间，降低固定温度（4℃），为此组织块不宜过厚。改用中性缓冲甲醛溶液，以pH7.2~7.4浓度0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10%甲醛固定液，减少固定液pH的变化。 戊二醛优点穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。 多聚甲醛（常用4%）可用于免疫电镜，也可用于免疫荧光染色。主要检测组织内一些性能较弱的抗原特别是细胞表面抗原，对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保持较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好，适用于免疫组织化学染色，但固定时间宽容度小，以24小时以内为宜。 醇类：最常用乙醇，使细胞内蛋白、糖类发生沉淀，穿透性强、抗原性保存好，但脱水性强，易引起组织收缩变硬，影响切片质量，所以固定时间不宜过长（2小时内）。乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。 关键步骤：把骨中的钙质脱掉 方法一：固定后脱钙 方法二：固定脱钙同时进行 厚度为0.3cm的淋巴结组织块，采用10%中性缓冲甲醛溶液固定的时间以12小时为佳 以上就是本期小沃与大家分享的组织固定问题及参考方法，您还有什么组织固定问题，欢迎在微信后台留言，我们将持续为您答疑。 【参考文献】 病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越，陈军主编.人民卫生出版社
组织 固定方法 注意事项 骨组织 非特殊需要，切忌使用酸性固定剂，如乙酸、苦味酸、三氯乙酸等，这些固定剂会使骨组织加速膨胀，破坏骨组织结构，使制片难以进行 淋巴结 新鲜的淋巴结样本应尽快进行取材和固定 肌腱组织 推荐采用Bouin液12-24小时，流水冲洗20分钟 苦味酸（picric acid)不会使组织硬化，有软化肌腱的作用，是该组织固定的良好固定剂 烧伤皮肤 采用A.G.M固定液，可使烧伤皮肤固定均匀，因有冰醋酸故渗透力较强，不会引起二次收缩变形 ／ 眼球 需采用眼球特殊固定液固定，西京固定剂既可保持较快的穿透作用，又避免了组织的硬化和过度收缩，可保留视网膜结构的完整 ／
